L'isolement des virus est un processus crucial dans la recherche virologique, le diagnostic clinique et le développement des vaccins. Une centrifuge réfrigérée joue un rôle vital dans ce processus, permettant la séparation des particules virales des autres composants d'un échantillon. En tant que fournisseur de centrifuges réfrigérés de haute qualité, je suis bien versé dans les procédures d'utilisation de ces instruments dans l'isolement des virus. Dans ce blog, je vous guiderai à travers les étapes spécifiques impliquées.
1. Préparation des échantillons
Avant d'utiliser la centrifuge réfrigérée pour l'isolement des virus, une préparation d'échantillons appropriée est essentielle.
Collection d'échantillons
La première étape consiste à collecter les échantillons appropriés. Ceux-ci peuvent inclure des fluides biologiques tels que le sang, la salive ou les homogénats tissulaires. Par exemple, dans le cas des virus respiratoires, les écouvillons nasopharyngés sont couramment utilisés. Lors de la collecte d'échantillons, des techniques aseptiques strictes doivent être suivies pour éviter la contamination.
Homogénéisation (si nécessaire)
Si l'échantillon est un tissu, il peut devoir être homogénéisé pour libérer les particules virales. UNMélangeur homogénéisateurpeut être utilisé à cet effet. L'homogénéisation décompose la structure des tissus et garantit que le virus est réparti uniformément dans la suspension. Après homogénéisation, l'échantillon est généralement filtré à travers un filtre à maillage fin pour éliminer les gros débris.
Ajout de tampons
Des tampons appropriés sont ajoutés à l'échantillon pour maintenir le pH et l'équilibre osmotique. Ces tampons peuvent également contenir des inhibiteurs de protéase pour empêcher la dégradation des protéines virales. Le choix du tampon dépend du type de virus isolé et des méthodes d'analyse ultérieures.
2. Chargement de la centrifuge réfrigérée
Une fois l'échantillon préparé, il est temps de le charger dans la centrifugeuse réfrigérée.
Sélection du rotor droit
La première étape du chargement de la centrifugeuse consiste à sélectionner le rotor approprié. Différents rotors ont des capacités différentes et sont conçus pour des types spécifiques d'échantillons et des exigences de séparation. Pour l'isolement du virus, un rotor à angle fixe ou un rotor de godeur oscillant peut être utilisé. Les rotors à angle fixe sont plus adaptés aux particules de virus à granulés, tandis que les rotors swinging-seau sont meilleurs pour la centrifugation du gradient de densité.
Équilibrer les échantillons
L'équilibrage est une étape critique dans l'utilisation d'une centrifugeuse. Les charges déséquilibrées peuvent provoquer des vibrations excessives, endommager la centrifugeuse et conduire à des résultats inexacts. Les échantillons doivent être placés dans des tubes de la même taille et remplis au même volume. Si nécessaire, des tubes factices remplis d'un volume de tampon égal peuvent être utilisés pour équilibrer la charge.
Chargement des tubes
Placez soigneusement les tubes équilibrés dans les fentes de rotor. Assurez-vous que les tubes sont correctement assis et sécurisés. Serrez le couvercle du rotor pour éviter toute fuite pendant la centrifugation.
3. Définition des paramètres de centrifugation
L'étape suivante consiste à définir les paramètres de centrifugation appropriés sur la centrifugeuse réfrigérée.
Vitesse
La vitesse de centrifugation est déterminée par la taille et la densité des particules virales. Généralement, des vitesses plus élevées sont nécessaires pour les particules de virus plus petites. Pour les virus les plus courants, des vitesses allant de 10 000 à 30 000 révolutions par minute (tr / min) sont utilisées. Cependant, pour les très petits virus ou pour la centrifugation du gradient de densité, des vitesses encore plus élevées peuvent être nécessaires.
Temps
La durée de la centrifugation dépend également du virus et de la méthode de séparation. Des temps de centrifugation plus courts sont utilisés pour les étapes de clarification initiales, tandis que des temps plus longs sont nécessaires pour plonger les particules virales. En règle générale, les temps de centrifugation peuvent aller de quelques minutes à plusieurs heures.
Température
Étant donné que de nombreux virus sont sensibles à la température, une centrifuge réfrigérée est utilisée pour maintenir une basse température pendant la centrifugation. La température est généralement réglée entre 2 et 8 ° C pour empêcher l'inactivation du virus.
4. processus de centrifugation
Une fois les paramètres définis, démarrez le processus de centrifugation.
Surveiller la centrifugeuse
Pendant la centrifugation, il est important de surveiller la centrifugeuse pour s'assurer qu'elle fonctionne bien. Vérifiez les bruits ou vibrations inhabituels, ce qui peut indiquer une charge déséquilibrée ou un problème mécanique. La plupart des centrifuges réfrigérés modernes sont équipés de capteurs et d'alarmes pour détecter ces problèmes.
Achèvement de la centrifugation
Une fois la centrifugation terminée, la centrifugeuse s'arrêtera automatiquement. Attendez que le rotor s'arrête complet avant d'ouvrir le couvercle de la centrifugeuse. Ceci est important pour éviter tout déversement ou dommage aux échantillons.
5. Post - Manipulation de la centrifugation
Après centrifugation, les échantillons doivent être soigneusement manipulés pour obtenir le virus isolé.
Séparation du surnageant et de la pastille
Si le but de la centrifugation était de plonger les particules de virus, retirez soigneusement le surnageant du tube à l'aide d'unMicropipette 5000ul. Le surnageant contient les composants et les débris solubles, tandis que le culot au bas du tube contient les particules virales.
Remise en suspension du culot
Le culot de virus est ensuite remis en suspension dans un petit volume de tampon. Cette étape nécessite une pipetétte douce pour éviter d'endommager les particules virales. Le virus remis en suspension peut être davantage purifié ou analysé.
Contrôle de qualité
Il est important d'effectuer un contrôle de qualité sur le virus isolé. Cela peut inclure la mesure du titre de virus en utilisant des techniques telles que les tests de plaque ou la réaction en chaîne de polymérase quantitative (qPCR). UNAnalyseur d'humidité pour la nourriturePeut également être utilisé pour assurer la bonne teneur en humidité des échantillons pendant le stockage.
6. Stockage du virus isolé
Un stockage approprié du virus isolé est crucial pour maintenir sa viabilité.
Geler le virus
Le virus isolé est généralement congelé à des températures ultra-basses, telles que - 80 ° C ou dans de l'azote liquide. Le gel aide à préserver le virus pour un stockage à long terme. Cependant, il est important d'ajouter des cryoprotecteurs à la suspension du virus pour éviter les dommages pendant le processus de congélation.
Étiquetage et documentation
Chaque échantillon de virus doit être correctement étiqueté avec des informations telles que le nom de l'échantillon, la date d'isolement et le type de virus. La documentation du processus d'isolement, y compris les paramètres de centrifugation et les résultats du contrôle de la qualité, est également essentielle pour une référence future.
Conclusion
L'utilisation d'une centrifugeuse réfrigérée dans l'isolement des virus implique une série d'étapes bien définies, de la préparation des échantillons à la manipulation et au stockage post-centrifugation. En tant que fournisseur de centrifuges réfrigérés, nous comprenons l'importance de fournir des instruments de haute qualité qui peuvent répondre aux exigences spécifiques de l'isolement des virus. Nos centrifuges sont conçus avec des fonctionnalités avancées telles que le contrôle de la température précis, les capacités à grande vitesse et les interfaces conviviales pour assurer une isolation virale précise et efficace.
Si vous êtes impliqué dans la recherche sur l'isolement des virus ou les travaux de diagnostic et que vous recherchez une centrifugeuse réfrigérée fiable, nous serions heureux de vous aider. Notre équipe d'experts peut vous fournir des informations détaillées sur nos produits et vous aider à choisir la bonne centrifugeuse pour vos besoins. Contactez-nous dès aujourd'hui pour commencer une discussion sur les achats et faire passer votre travail d'isolement viral au niveau supérieur.
Références
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., et Walter, P. (2002). Biologie moléculaire de la cellule. Garland Science.
- Mahy, BWJ et Van Regenmortel, MHV (éd.). (2009). Encyclopédie de bureau de la virologie générale. Presse académique.
- Murphy, FA, Fauquet, CM, Bishop, DHL, Ghabrial, SA, Jarvis, AW, Martelli, GP, ... & Zerbini, FM (2012). Taxonomie virale: neuvième rapport de la Commission internationale de la taxonomie des virus. Elsevier.